以蝴蝶兰新品种海龙王(Phalaenopsis‘DragonKing’)的花梗为材料，以1／3MS(1／3MS大量和微量)为基本培养基，研究不同椰子汁用量对花梗诱导的影响。结果表明，添加75mr／L椰子汁的诱导效果与添加mg／L椰子汁一致。以去茎尖的茎段作为继代增殖的材料，以附加6mg/L6一BA+0．5mvLNAA的培养基表现最佳，(25±1)℃下培养可缩短培养时间，且增殖表现理想。
蝴蝶兰新品种海龙王(Pha／aenops／s‘DragonKing’)花型饱满，花朵硕大，花色艳丽，花序优美，深受市场欢迎。目前国内外已广泛应用组织培养技术进行蝴蝶兰的快速繁殖，大大促进了蝴蝶兰组培种苗工厂化生产的发展?。近年来，国内外对蝴蝶兰组织培养的研究报道很多，并取得了一定进展，但仍然存在一些问题，如培养过程中繁殖系数偏低、增殖难、继代所需周期偏长等旧-。本研究比较了培养配方和培养温度对海龙王花梗分化和继代增殖培养的影响，建立了速度快、成本低、变异率低、适用于工厂化生产的快速繁殖技术流程。
1材料与方法
1．1材料
以蝴蝶兰新品种海龙王为试材。椰子汁。
1．2试验设计
不同椰子汁用量对蝴蝶兰新品种海龙王花梗分化影响试验设计方案见表1。不同激素组合NAA和6一BA对海龙王继代增殖影响试验设计方案见表2。不同培养温度对海龙王继代增殖影响试验设计方案见表3。
1．3方法
1．3．1培养基
花梗分化和继代增殖基本培养基为1／3MS(1／3MS大量和微量)，所有培养基均附加肌醇0．1g／L，蛋白粉lg／L，蔗糖30mg/L，琼脂6．0g/L，pH值为5．8。
1．3．2外植体处理选择低温温室栽培的母株，取材前1周停止浇水，分别喷施杀虫剂、杀菌剂各1次。剪切3～4朵已开放的花，花梗健康、茁壮、饱满、有腋芽。用75％乙醇擦拭花梗3遍后用包装纸密封带回组培室。再用75％乙醇擦拭花梗3遍，将花梗切段，以切口距芽两端各1．5cm为宜。将切割好的花梗节段用漂白水一水(体积比为1：2)消毒液消毒5rain，取出并放于无菌切割纸上，用小弯镊剥去苞片，再用漂白永一水(体积比为1：5)消毒液消毒4rain，最后用无菌水冲洗2次，取出放于无菌切割纸上晾干。将花梗两端各切去0．5～1．0cm，将节段基部向下斜插入诱导培养基中，芽点朝上，每瓶接种1个含芽节段，贴上标签。
1．3．3培养条件各材料均在植物组培室中培养，花梗分化培养温度为(27±1)℃，继代增殖培养温度分别为(25土1)和(23±1)℃，光照时间为10h／d，光照强度～lx。
2结果与分析
2．1不同椰子汁用量对海龙王花梗分化的影响
将海龙王花梗外植体分别接入附加3m∥L6一BA+0．3mg／LNAA及添加或不添加椰子汁的花梗分化培养基中，每处理接种30瓶，3次重复。培养63d时统计芽苗及收获系数，试验结果见表1。从表1可知，花梗诱导形成的营养芽在加入椰子汁的培养基中茎部粗壮，叶片肥厚，生长快速，培养时间可缩短10一15d，与不加椰子汁处理差异显著。可见，椰子汁对花梗诱导分化成芽有明显的促进作用。随着椰子汁用量的增加，芽数也增多，收获系数逐渐增大。当椰子汁用量增加至me／L时，培养时间、芽数及收获系数与75mg／L时元明显差异。综合考虑生长速度、生产成本和收获系数，在花梗分化培养基中加入75m∥L椰子汁较为理想。
2．2不同浓度激素组合对海龙王继代增殖的影响
将花诱导分化获得的营养芽切除叶片，分割成0．5—1cm大小的单芽，分别接人附加mg／L椰子汁及不同用量组合6一BA和NAA的1／3Ms培养基中，每处理接种20芽／瓶，共3瓶，重复3次，培养56d时统计芽苗和收获系数，结果见表2。从表2可见，在附加6叫L6一BA+0．5mg／LNAA的培养基中主侧芽差异小，可分割的单芽数多，收获系数最大(图1)，是海龙王继代增殖的理想培养基。NAA与一定浓度的6一BA配合使用可促进侧芽的萌发和生长。在附加低浓度6一BA的培养基中，无论添加NAA与否，主侧芽差异都大，侧芽少，收获系数低，这可能是由于6一BA浓度是影响侧芽生长发育的主导因素，NAA起辅助作用。在附加高浓度6一BA的培养基中，主侧芽差异大，侧芽多但小，可分割的单芽数少，收获系数较低，还容易增殖出原球茎，添加NAA后畸形芽更多。产生原球茎的原因可能是高浓度的细胞分裂素配合生长素使用能加快细胞分裂。
2．3不同培养温度对海龙王继代增殖的影响
将花诱导分化获得的营养芽切除叶片，分割成0．5—1em大小的单芽，分别接入供试培养基(1／3MS+6mg／L6一BA+0．5mg／LNAA+mg／L椰子汁)中，每处理接种20芽／瓶，共3瓶，重复3次，在不同温度下进行培养，培养45d时统计侧芽长度和主芽叶生长量，培养63d时统计芽苗和收获系数，结果见表3。从表3可知，(25±1)℃下收获系数高，主侧芽生长快(图2)，培养时间减少30d。
3结论与讨论
研究表明，—mg／L椰子汁对植物细胞和组织的增殖和分化有明显的促进作用，这可能与椰子汁中含有较多蛋白质、硫胺素、核黄素、抗坏血酸、钾、钠、钙、镁、磷等营养成分有关。本研究表明，添加75mg／L椰子汁有利于促进海龙王花梗分化和营养芽的生长。何松林等研究表明，椰子汁有利于白花系蝴蝶兰试管苗地上部鲜质量积累¨1。王海娟认为，将花梗分化获得的营养芽继代增殖在附加5mg／L6一BA+0．2mg／LNAA的培养基中最合适，需高浓度6一BA与低浓度NAA混合使用，这与本试验的最佳组合6mg／L6一BA+0．5mg／LNAA一致，随着6一BA浓度的增高，容易增殖出原球茎。有学者认为，蝴蝶兰组织培养温度以(25．4-2)qC较为适宜，与本试验的理想温度范围一致，蝴蝶兰组培继代增殖温度不宜低于23℃。
本文作者：甘惠芳，郑金生，吉群，吕立才，王生旭，涂小云，王玲连云港花卉研究院，由中国植物组培网整理发布，如有不周之处，请来电告知，或者有好的技术文章想与大家分享，欢迎联系管理员！
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